Th9细胞：Th9 细胞是一种新型的辅助性T细胞的亚群，它对抗寄生虫感染特别是线虫起着重要作用。IL-4 与 TGF-β同时作用可诱导初始T细胞分化成 Th9 细胞，Th2 细胞在 TGF-β作用下可转化为 Th9 细胞。除了分泌抗炎性细胞因子 IL-10 外，Th9 同时也与炎性疾病相关，比如过敏性炎症。Th9 细胞不表达其它Th细胞已知的特异转录因子，包括 T-bet， GATA-3， Foxp3 还有 ROR γt， 其中 GATA-3 在 Th9 分化初期一度出现。分泌的细胞因子主要为 IL-9 和 IL-10。

小鼠脾脏细胞Th9极化实验

1.根据实验方法从小鼠脾脏中分离出细胞。

2. anti-mouse  CD3ε 包被实验：在细胞培养板上，加入 anti-mouse  CD3ε, clone 145-2C11  (5μg/ml)。37℃孵育2小时或者4℃过夜。然后将液体轻轻地倒出，用无菌 PBS 进行清洗3次，弃上清。

3.将分离出的脾脏细胞以1 x 106/ml的浓度种于包被好的培养板中，同时加入 anti-mouse  CD28, clone 37.51 (5μg/mL)， TGF-β1 (10 ng/mL), IL-4 (10 ng/mL), IL-2 (20ng/ml), anti-mouse  IFN-β (10μg/mL)进行培养。

4.细胞培养3天后，收集细胞进行清洗。然后用含有500 ng/ml PdBU, 500 ng/mL  ionomycin,  以及 Brefeldin  A  的培养基对细胞进行刺激4-5小时。

5. 细胞结束刺激后，收集细胞，进行染色实验。

相关实验材料

RBC  Lysis  Buffer  ( cat. # 420301 )， Anti-mouse  CD3e,  clone  145-2C11  ( LEAFTM  format,  cat. # 100314)， Anti-mouse  CD28,  clone  37.51,  ( LEAFTM  format, cat. # 102112 )， Anti-mouse  IFN-g  ( LEAFTM  format, cat. # 505812 )， Recombinant  mouse  IL-4  ( cat. # 563202 )，R ecombinant  human  TGF-b1  ( carrier-free )  ( cat. # 580702 )， Recombinant  mouse  IL-2  ( cat. # 575402 )，  Brefeldin  A  ( cat. # 420601 )， PMA  ( cat. # P8139  from  Sigma )， Ionomycin  ( cat. # I0634  from  Sigma )

参考文献：

1. Soler, D. et al. 2006. J Immunol. 117:6940.           

2. Schmitt, E. et al. 1994. J Immunol. 153:3989.

3. Veldhoen, M. et al. 2008. Nat Immunol. 9:1341.      

4. Darhalhon, V. et al. 2008. Nat. Immunol. 9:1347.