Treg 细胞：Treg 细胞（也称作调节性T细胞或者是T调控细胞）是具有显著免疫抑制性功能的细胞。它能够抑制其他细胞的免疫应答，在维持机体免疫平衡和预防自身免疫疾病、移植排斥方面发挥着重要作用。Treg 细胞特异性地表达 CD4+ CD25+ Foxp3+， CD127 不表达或者弱表达。IL-2 和 TGF-β 是诱导 Treg 主要的细胞因子。 

小鼠脾脏CD4+ T细胞Treg极化实验

1.根据实验方法从小鼠脾脏中分离 naive  CD4+  CD25−  T 细胞。

2. anti-mouse  CD3ε 包被实验：在细胞培养板上，加入 anti-mouse  CD3ε,  clone  145-2C11  (10 μg/ml),。37℃ 孵育2小时或者4℃过夜。然后将液体轻轻地倒出，用无菌 PBS 进行清洗3次，弃上清。

3.将分离出的 naive  CD4+  CD25−  T 细胞以 5 x105/ml 的浓度种于包被好的培养板中同时加入 anti-mouse  CD28, clone  37.51  (10 μg/ml)， TGF-β1  (5 ng/mL), IL-2 (10 ng/ml)进行培养。

4.细胞培养3天后，收集细胞进行清洗。然后进行细胞染色实验。

实验相关材料

RBC  Lysis  Buffer  (cat.  # 420301)； Anti-mouse  CD3e (LEAF™  format,  cat. # 100314)， Anti-mouse  CD28  (LEAF™  format,  cat. # 102112)， Recombinant  Mouse  IL-2  (carrier-free)  (cat #575402)， Recombinant  human  TGF-β1  (carrier-free)  (cat.  # 580702)，  Brefeldin  A  (cat.  # 420601)， PdBu  (Phorbol  12,13-dibutyrate)  (cat.  # P1269  from  Sigma)

参考文献：

1.Rahul Roychoudhuri，et al. 2013.Nature 498:506-510.  

2. Nicholas Arpaia，et al. 2013.Nature 504:451-455.

3. Steven Z. Josefowicz,et al.2012.Nature 482:395-399.

4.Emily B Heikamp,et al.2014 Nature Immunology 15:457-464.