为让您的流式实验更完善,结果更客观理想,现列出实验所需的全套缓冲液:
420201 Cell Staining Buffer 是流式实验全程通用缓冲液,含有小牛血清,可降低抗体和荧光素的非特异性结合;含有细胞代谢抑制剂NaN3,可防止表面抗原的覆盖。
胞内染色实验中,在标本活化的后期加入阻断剂(蛋白运输抑制剂)通常比较重要,能够防止胞内因子分泌到胞外。可根据标本的种类选择不同的阻断剂。
420301 RBC Lysis Buffer (10X) 是一款用于裂解小鼠脾脏和人外周血中红细胞的裂红液。很温和,对白细胞的影响很小。但对有核的红细胞没有裂解作用。
422401 RBC Lysis/Fixation Solution (10X) 是一款适用于人全血标本染色的裂红液,含有固定剂的成分,在裂解红细胞的同时对白细胞有固定作用。
某些细胞表面表达 Fc 受体,可与免疫球蛋白(抗体)的 Fc 段发生结合,该结合对于抗原-抗体的特异性结合而言,是非特异性的,从而导致了背景的增加,甚至是假阳性。因此对于检测这些细胞的表面标志时,封闭抗体与 Fc 受体的结合是必须的。通常表达 Fc 受体的细胞有 B 细胞、滤泡性 DC、 NK 细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞等。
注意:422301 TruStain FcX™ (Human) 并不影响 anti-human CD16 (clone 3G8), anti-human CD32 (clone FUN-2) 和 anti-human CD64 (clone 10.1) 与抗原的结合。
如果您要检测胞浆内的分子(如细胞因子),请使用以下固定破膜剂:
如果您要检测核内的分子,请使用以下固定破膜剂(注意:某些核内抗原需要70% Ethanol 固定破膜,具体方法请见说明书):
有时实验结束后需要延迟一段时间才能上机,或者实验需要中断,此时需要相应的 Buffer 来维持指标的稳定性:
422101 FluoroFix™ Buffer 适用于任何 Protocol 中的固定步骤,因比其他款固定剂温和,尤其适用于耦合荧光素的固定。标本固定后,可以在 Cell Staining Buffer (Cat#:420201) 中4度避光保存两天。
422501 Cyto-Last™ Buffer 适用于分泌胞内因子细胞的储存。胞内实验固定之后,标本重悬在此 Buffer 中,4度避光可保存2周!