Part3——Denovo FCS Express6 试用版使用指南-入门篇（中）

1. 手动脱机调补偿及自动调补偿

A. 手动调补偿（一般在仅有样本管或者自动调补偿后微调时使用）

打开软件，插入一个数据（示例中为彩点图），当插入一个图形后，如需更换数据的显示方式，如想将彩点图更换为其它图形（如密度图等），可选中该图形，直接按照下述步骤更改。

圈中目的细胞群，拖至空白处形成一个新的图形，并根据需要改动横纵坐标轴的参数。本示例中以FITC和PE为例，调节此两通道之间的补偿。下图所示，补偿未经过调节，FITC与PE之间有补偿。

此时可以手动调节两通道之间的补偿，该数据为FITC单管，可用PE-FITC调节FITC渗漏到PE通道去的荧光。步骤如下图所示：

出现补偿编辑栏，从PE通道中去除FITC的荧光信号，使PE通道的Mean/Median值与阴性细胞群一致。

点击OK，则FITC渗漏到PE通道的荧光被扣除。

B. 自动调补偿（需要阴性管及各单阳管）

    打开软件，按照下述步骤操作。

建立直方图后，在原本的版面Page 1后面出现Scatter Plot及其它各个单管的Control界面。

接着，在Scatter Plot版面中，将门的位置移至正确的细胞群所在的位置，如下图所示。

如所示的方形门不能正确的圈出细胞群，可按以下步骤将该门改变为自由形门等。

圈好门之后，选中单管Control版面，按照阴性细胞与阳性细胞的位置调整Marker门的位置。

依次调整好各单管Control的Marker门的位置。此处不一一列举。回到补偿界面。此处的3、4适用于使用补偿beads调节补偿的情况（由于本次数据为细胞，此处不详细列出，如对此步骤感兴趣，可咨询小达君）

则自动调补偿就完成了。补偿矩阵及溢出矩阵就出现在补偿栏中。

此时，可点击保存将此补偿下来，以便下次使用。回到Page 1，当添加一个未经过补偿调节的数据时，将该补偿拖过去，则该补偿矩阵就被应用到数据中。

或者通过右键-Format-Overlay-Compension将补偿应用到该数据中。如下图所示：

2. 实验数据的统计

选择右键-Statistics，可添加门数据及十字门象限数据。

本期就先介绍到这里，大家是不是对Denovo软件有了更进一步的认识？我们会陆续推出Denovo软件的功能介绍及流式数据分析的技巧，感兴趣的同学可以下载试用哦。