融合蛋白标签的“利器”——TEV蛋白酶

昨天，小达君为大家带来了抗体纯化用IBA新品—Protein A Agarose，今天我们继续来说说蛋白表达纯化那点事儿。

通常，我们会利用融合标签与目的蛋白的融合表达实现某些实验目的，例如，蛋白纯化（Strep-tag、His）、增强蛋白的可溶性（MBP、GST）、增加蛋白的表达量（Flag、GST）、报告目的蛋白表达情况（GFP）等。但是，当融合标签完成了它的使命，又会影响下游的某些实验时，例如免疫动物、影响目的蛋白活性，我们就需要考虑如何将其去除。小达君为您推荐一款去除融合标签的利器——Lucigen的SelecTEV™ Protease，简单的实验操作即可得到较纯的目的蛋白。

SelecTEV™蛋白酶是一种基因工程改造的烟草蚀刻病毒（TEV）蛋白酶，通过His标签的亲和层析从大肠杆菌中纯化，SDS-PAGE分析表明其纯度为90％。SelecTEV™蛋白酶能够识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七个氨基酸以及与其密切相关的序列，并在Gln和Gly残基之间进行切割。 这七种氨基酸序列在蛋白质中很少见，使得SelecTEV™蛋白酶成为从融合蛋白中去除标签的理想选择。利用蛋白酶N-末端的His标签通过亲和层析即可从酶切反应中除去SelecTEV™蛋白酶。

产品特点：

• 经过基因工程改造，与天然蛋白酶相比具有更高的特异性，活性和稳定性；

• 带有His标签（六个组氨酸），更易于去除；

• 1unit SelecTEV™蛋白酶在30°C下、1h内可以切割≥85％的3μg对照底物；

• SelecTEV™蛋白酶最佳切割温度30°C，但在很宽的温度（4 - 30°C）和pH（6.0 - 8.5）范围内有效，以适应您的特定蛋白质。

实验流程如下：

酶切反应完成后，用标签特异性纯化柱去除融合标签，收集流穿液。为去除流穿液中的TEV蛋白酶，利用镍柱进行二次纯化，得到的流穿液中的蛋白即为纯的目的蛋白。

产品信息：

Lucigen公司成立于1998年，提供各类用于分子生物学研究相关产品，可以使研究者成功克隆较难克隆的基因。2016年Lucigen收购了Illumina旗下Epicentre产品线，2018年又被英国LGC公司收购。目前产品线主要包括：体外转录、基因克隆（BAC克隆试剂盒）、感受态细胞（TG1噬菌体文库构建感受态）、体外扩增、转座子突变、蛋白表达、核酸提取等。