ELISpot：单细胞视角下的免疫革命

ELISpot检测最初于1980年代初开发并报道，用于计数分泌特异性抗体的B细胞，随后，该技术被调整并应用于定量人或小鼠样本中产生特定细胞因子的免疫细胞。自此，ELISpot技术开始迅速发展，并与ELISpot图像分析相结合，目前已广泛用于免疫学研究和临床应用，可用于测量多种类型免疫细胞对微生物病原体、疫苗以及外来或自身抗原的抗原诱导或自发性特定细胞因子反应。它的检测原理为：炎症细胞分泌的细胞因子被膜上的捕获抗体捕获，并通过二级检测抗体与在捕获的细胞因子部位沉淀形成可见斑点的底物结合进行可视化。与酶联免疫吸附测定（ELISA）相比，ELISpot测定的优势在于不仅可以测量单细胞水平的细胞因子反应，而且对产生特异性细胞因子的细胞具有更高的检测灵敏度。目前ELISpot已成为主流免疫学检测技术之一，在国内外免疫学界获得了高度的认可和广泛的关注，那么它有哪些优点呢？

技术优势：

1. 高灵敏度：ELISpot理论上可达到百万分之一的灵敏度，即一百万个细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞就能检测出来。

2. 单细胞水平：检测的是单个细胞分泌，而非细胞群体的平均分泌，对研究生物体的细胞免疫和细胞功能提供有效的检测策略。

3. 功能性检测：动态的免疫检测，斑点代表分泌细胞在一段时间内的分泌动态，即“Footprint”。斑点的强弱和数量反映了细胞对刺激物的反应能力和分泌细胞因子的动态能力。

4. 高通量检测：整个流程基于96孔微孔板，适用于高通量实验和筛选。

5. 重复性和检测性高：冻存的细胞同样可进行ELISpot检测。

达优ELISpot应用领域及案例：

1. 疫苗研发：用于评估疫苗诱导的特异性免疫反应。

案例：2020年CDE发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究》指导原则中强调了mRNA疫苗的质量研究需要进行体内效力试验，推荐使用ELISpot技术检测评价mRNA疫苗的细胞免疫反应；2025年发表文章中也有使用ELISpot技术检测评估纳米疫苗的免疫反应^[1]等；

2. 基因治疗：检测基因治疗过程中可能引起的免疫反应

案例：Kathryn团队在AAV基因治疗药物Roctavian®的III期临床试验中，通过IFN-γELISpot试验检测了16名受试者对AAV5衣壳蛋白的细胞免疫反应^[2]；

3. 临床诊断

案例：Oxford Immunotec公司开发了全球第一个基于ELISpot原理的T-SPOT.TB结核病诊断试剂盒，用以定量检测患者血液或体液标本中结核效应T细胞数，根据阳性细胞数（即显色的斑点数）来判断患者结核分枝杆菌感染状态，辅助临床诊断和排筛结核。

4. 器官移植

案例：器官移植之前，应用ELISpot对供体与受体做免疫相容性检测，HLA匹配，则供受体细胞之间相容性好，较少刺激物斑点，提示移植手术成功率高，反之亦然。在器官移植手术后，用ELISpot监视患者体内的免疫排斥反应，可以有针对性的用药，避免盲目的使用免疫抑制剂。

5. 免疫学基础研究

案例：根据检测的细胞因子的不同，ELISpot可以用来区分被激活的不同的T细胞亚群。例如Th1细胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些细胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2细胞分泌的。在过敏研究中的一个热点就是采用ELISpot测定Th2型细胞因子，因为Th2反应是过敏的主要反应，但通常都是低频率岀现，需要高度灵敏方法才能被成功检测到。

那么达优可以为大家提供哪些种属及指标的ELISpot试剂盒呢？

产品列表

达优ELISpot产品采用高亲和力、高效价抗体对，经预包被PVDF板、低温冷冻干燥、真空密封包装等工艺流程制备。成品PVDF板上预包被的抗体分布均匀、效价稳定，实验检测时间从3天缩短为2天，大幅度减少无菌操作的实验步骤，减轻实验者的劳动强度和减少污染的机会。使得实验者能够轻松、高效地完成复杂的ELISpot检测实验。