这一期和大家介绍一下转座酶。需要详细了解的小伙伴们,赶快来看一下吧!
1983年,诺贝尔生理学或医学奖颁给了81岁的美国遗传学家巴巴拉-麦克林托克,因为她提出了“移动的控制基因学说”。麦克林托克先发现玉米中有的单个基因是能跳跃的,即从染色体的一个位置跳到另一个位置,甚至从一条染色体跳到另一条染色体上。这种会“跳跃”的基因就是“转座因子”,目前通称“转座子”(transposon)。
转座子是自然发生的遗传因子,最先在玉米中被发现,之后在细菌、真菌及动植物中也都有发现。如玉米的Ac/Ds、Spm/En类及金鱼草的Tam类转座子,果蝇的P因子,来源于鳞翅目昆虫的piggyBac转座子等。
转座子通过转录或逆转录方式,在内切酶的帮助下,在生物染色体间移动。目前,已知转座子主要通过两种方式进行转座:复制型转座和非复制型转座。
复制型转座即是在转座时,先将转座子DNA转录形成RNA中间产物,再逆转录形成新的相同的DNA,新形成的转座子DNA移动到其他新位置,而原来的转座子仍保留在原来位置,这个过程需要转座酶和解离酶的参与;而非复制型转座则直接从原来的位置切除下来并转移到新的位置,整个过程不会形成RNA中间产物,只需要转座酶的参与。
EZ-Tn5转座子可在体外插入到含有靶DNA的载体。当EZ-Tn5转座子在没有镁离子孵育时,形成稳定的EZ-Tn5转座体复合体,可以被电击进入活细胞,一旦进入细胞中,转座体由细胞内镁离子活化,就能随机插入到宿主的基因组DNA中。
图1. EZ-Tn5转座子插入(体外/体内)
Lucigen提供的EZ-Tn5转座酶是Tn5转座酶的高活性突变形式,是一种高效酶,用于在体外将EZ-Tn5转座子插入到任何目标DNA中。
参考文献
Van Hoang, K. el al.(2011) Applied and Environmental Microbiology 77, 2309-2316.
Hartmann, I, et al. (2010) Applied and Environmental Microbiology 76: 2251-2261.
Langridge, et al. (2009) Genome Research 19: 2308-2316.
产品信息
美国Lucigen公司成立于1998年,提供各类用于分子生物学相关产品,可以使研究者成功克隆较难克隆的基因,其在2016年收购了Illumina旗下Epicentre产品线。目前产品类别主要包括:体外转录、基因克隆(BAC克隆试剂盒)、感受态细胞(TG1噬菌体文库构建感受态)、体外扩增、转座子突变、蛋白表达、文库构建等。
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